Рекомендации по хранению и обращению с синтетическими пептидами.


После того, как Вы воспользовались нашей услугой "Синтез пептидов", желательно прочитать данную инструкцию. Правильное длительное хранение лиофилизированных синтетических пептидов, их корректное растворение и хранение в растворенном виде позволят Вам использовать пептиды в экспериментах в течение длительного времени, не опасаясь за то, что их качество ухудшится.
Ниже приведены некоторые базовые рекомендации по обращению с синтетическими пептидами.

Хранение лиофилизированных пептидов.

Лиофилизированные пептиды стабильны при комнатной температуре вдали от яркого света в течение нескольких недель. Однако, для более длительного хранения (более года) мы рекомендуем хранить лиофилизированные пептиды при температуре < 0 C (-20 C или -80 C).

Открытие пробирки с лиофилизированным пептидом.

В большинстве случаев лиофилизированные пептиды гигроскопичны. Абсорбция воды из окружающей атмосферы может уменьшить стабильность лиофилизированного пептида при длительном хранении и понизить его общее качество. После того как Вы достали пробирку с лиофилизированным пептидом из морозильника с температурой <0 C, перед отвинчиванием крыжки инкубируйте пробирку при комнатной температуре в течение 5-10 мин для уравновешивания температуры лиофилизированного пептида с температурой в комнате.

Растворение лиофилизированных пептидов.

Следует заметить, что не существует универсального способа для растворения всех лиофилизированных пептидов. В некоторых случаях необходимо протестировать несколько растворителей, пока не будет найден оптимальный, оптимизацию растворения следует проводить или на очень маленьких аликвотах, или, начиная с растворителей, от которых будет легко избавиться лиофилизированием. В общем случае перед растворением всей навески в выбранном Вами буфере, попробуйте растворить в нем ее часть. В качестве первого растворителя мы рекомендуем использовать просто деионизованную воду. Далее будут приведены рекомендации по растворению пептидов.

Определение растворимости лиофилизированного пептида.

Перед растворением лиофилизированного пептида в выбранном Вами буфере или деионизованной воде следует определить его аминокислотный состав, рассчитать его изоэлектрическую точку, общий заряд и индекс гидрофобности. Мы рекомендуем использовать для расчета аминокислотного состава, изоэлектрической точки и индекса гидрофобности on-line программу «ProtParam». Для расчета кривой титрования и общего заряда пептида можно использовать on-line программу «Protéine». Для расчета общего заряда пептида вместе с его различными модификациями можно использовать on-line программу «Peptide-PNA Calculator».

Правила и порядок растворения лиофилизированных пептидов.

  1. Начинать растворение пептида следует в деионизованной воде, далее в веществах легко удаляемых лиофилизированием (уксусная кислота, ацетонитрил, изопропанол, этанол, но не ДМФ и ДМСО)
  2. Если пептид нерастворим в водной среде – соницирование может быть полезным. НЕ ОЗВУЧИВАЙТЕ раствор с пептидом более 5 мин.
  3. Пептиды, содержащие C,W или M, подвержены окислению, для их растворения следует использовать деоксигенизированную воду, кислый pH и не использовать ДМСО.
  4. Не растворять пептиды с С-концевым Q в кислых растворах из-за образования циклического пироглутамата.
  5. Пептиды короче 6 ак обычно растворимы в водной среде, за исключением случая когда все ак сильно гидрофобны.
  6. Гидрофильные пептиды, содержащие >25% заряженных ак и <25% гидрофобных ак, также хорошо растворимы в водной среде.
  7. Гидрофобные пептиды, содержащие 50-75% гидрофобных остатков, могут быть нерастворимы или частично растворимы в водной среде, даже, если оставшиеся 25 ак заряженные. Такие пептиды сначала лучше растворять в минимальном количестве сильного растворителя: ДМФ, 5-50% ацетонитрил, изопропанол, этанол, 10-50% уксусная кислота, 4-8 М мочевина или гидрохлорид гуанидина, ДМСО (если в последовательности пептида нет C,W или M). После растворения по каплям добавляйте раствор с пептидом в водную среду при постоянном перемешивании, наблюдая за помутнением раствора, если раствор не помутнел, то пептид растворился полностью, при помутнении раствора дальнейшее добавление пептида следует прекратить, считая, что водный раствор пептида стал насыщенным. ВАЖНО, выбирать первичный растворитель исходя из его совместимости с Вашим экспериментом.
  8. Сильногидрофобные пептиды, содержащие >75% гидрофобных остатков, обычно не растворяются в водных растворах. Для их растворения необходимо использовать большие объемы сильных денатурирующих веществ, а их последующие добавление в водный раствор сразу приводит к его помутнению. ПРИ НЕОБХОДИМОСТИ работы с такими пептидами в экспериментах с биологическими объектами в компании «АТГ Сервис Ген» разработан специальный подход для их растворения.
  9. Пептиды, содержащие >75% таких ак, как of S,T,E,D,K,R,H,N,Q,Y, в водном растворе интенсивно образуют внутри и межмолекулярные водородные связи - «гелевая структура раствора». Для их растворения следует обратиться к пункту 7.
  10. Концентрация 1-2 мг/мл оптимальна для стокового раствора. При правильно подобранном растворителе и дизайне пептида и при условии редкого размораживания-оттаивания стокового раствора (для этого его надо разаликвотировать) стоковый раствор пептида стабилен при +4 C - < недели, при -20 C - < года, при -80 C - > года.

В общем виде стратегия растворения лиофилизированного пептида выглядит следующим образом (каждый следующий пункт необходим при отрицательном результате предыдущего):

  1. Приготовление концентрированного раствора пептида:
    • · Растворяем в деионизованной воде
    • · Соницируем 5 мин
    • · Добавляем аликвоту 50% уксусной кислоты
    • · Соницируем 5 мин
    • · Добавляем равный объем 50% уксусной кислоты
    • · Соницируем 5 мин
    • · Добавляем ¼ объема ацетонитрила
    • · Соницируем 5 мин
    • · Лиофилизируем
    • · Растворяем в ДМФ и ДМСО
    • · Соницируем 5 мин
  2. Доводим раствор пептида буфером до конечной концентрации.

Надеемся, что наши рекомендации помогут Вам в работе с лиофилизированными пептидами. Наши специалисты всегда готовы принять участие в планировании Вашего эксперимента, связанного с синтезом пептидов.